PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù) “變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。 

二、PCR分類

1. 普通的PCR儀

一次PCR擴(kuò)增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀。

用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。

（1）梯度PCR儀： 一次PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度)，通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。

用途：研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增。

（2）原位PCR：將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析，在細(xì)胞內(nèi)實現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通PCR儀。

用途：用于在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。

2. 實時熒光定量PCR儀

PCR擴(kuò)增時加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實時輸出量化結(jié)果，這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。